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Abstract

El objetivo principal de esta Tesis fue el desarrollo de técnicas moleculares específicas para el hongo patógeno humano Scedosporium prolificans, encaminadas a adquirir un mayor conocimiento de su taxonomía, variabilidad genética y patogenicifdad, así como aportar alternativas al problema de su resistencia total a los antifúngicos. El análisis de la región del rDNA nuclear que comprende los dos espaciadores transcritos y la subunidad 5,5S (ITSI-5,8S-ITSII) confirmó la relación filogenética entre las dos especies de Scedosporium (S.prolificans y S.apiospermum). Se estudió la resistencia intrínseca de S.prolificans a los antifúngicos, y en particular a la anfotericina B. Como alternativa a este problema se evaluaron combinaciones de antimicrobianos, encontrándose un resultado sinérgico en el caso de la anfotericina B combinada con cicloheximida. La comparación de aislados clínicos y ambientales de S.prolificans no reveló diferencias que pudieran afectar a su virulencia. La amplificación aleatoria de DNA polimórfico (RAPD) y la amplificación con iniciadores únicos dirigidos a secuencias de minisatélites de eucariotas ("PCR-fingerprinting") se emplearon para tipificar cepas de S.prolificans y estudiar dos brotes de infecciones hospitalarias causadas por S.prolificans. Se aislaron mediante la luz ultravioleta mutantes de S.prolificans deficientes en la síntesis de melanina que presentaron la misma resistencia a los antifúngicos que la estirpe salvaje original. También se desarrolló un método de transformación genética de S.prolificans por electroporación, empleando la resistencia a higromicina B como marcador de selección, y la región del rDNA secuenciada previamente para construir un vector específico de S.prolificas.#