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Estudio de la expresión del receptor mGluR1a del sistema nervioso central de "Rattus novergicus" en la levadura "Schizosaccharomyces pombe" y líneas celulares de mamífero

Regidor Cerrillo, Javier (2004) Estudio de la expresión del receptor mGluR1a del sistema nervioso central de "Rattus novergicus" en la levadura "Schizosaccharomyces pombe" y líneas celulares de mamífero. [Thesis]

Official URL: http://eprints.ucm.es/tesis/far/ucm-t25086.pdf

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Abstract

El objetivo fundamental de este trabajo es la expresión funcional de receptores del Sistema Nervioso Central en un sistema heterólogo como son las levaduras. Se trata de intentar acoplar funcionalmente el receptor metabotrópico de L-glutamato de rata (mGluR1) a un sistema de la levadura S. Pombe cuantificable, y en concreto a la carcada de apareamiento, debido a la gran semejanza estructural y funcional de dicho receptor con los receptores de feromonas de levaduras. Esta estrategia perimitiría el estudio de su interacción con ligandos agonistas y antagonistas, el análisis molecular de los mismos y finalmente, la búsqueda y detección de nuevas moléculas farmacológicamente activas. El receptor mGluR1a fue expresado en una cepa heterotálica de la levadura Schizosaccharomyces pombe. El análisis de expresión de RNA permitió comprobar el alto nivel de la transcripción del receptor, así como se comprobó alto grado de expresión de la proteina y su correcta localización en la membrana plasmática. Pero, a pesar de estos datos alentadores y de usar un sistema de detección-cuantificación específico y altamente eficiente, desarrollado en esta memdoria para la detección de la activación de la cascada de apareamiento, los resultados obtenidos fueron negativos. El desarrollo de proteínas de fusión del receptor mGluR1a con la subunidad Ga de S. Pombe y una subunidad quimérica de la subunidad Ga. De S. Pombre y Ga0 de X. Laevis, no mejoraron los resultados. Si bien, el desarrollo de proteínas similares basadas en el receptor mam2+ de S. Pombe (de la ruta de feromonas) y estas subunidades Ga, revelaron datos significativos para comprender el mecanismo de iteneracción entre receptores y proteínas G y la realización de posteriores estudios de expresión heteróloga análogos a los efectuados. Los estudios de unión a ligando radiactivo de los transformantes y de otros estudios de electroforesis de proteínas desvelaron que el procesamiento y plegamiento del receptor mGluR1a en S. Pombe no tenía lugar correctamente y, por lo tano, afectaba a la unión del ligando y funcionalidad. Se efectuaron estudios similares en la línea celular (LCL) 45 EM 18 humana. Los estudios de expresion, mediante técnicas inmunológicas indirectas y microscopía confocal, y de unión a ligando en trasnfectantes de esta línea, indicaron lo adecuado del sistema. Por último, un estudio detallado de los anticuerpos desarrollados frente al extremo aminoterminal del receptor mGluR1a elaborados en nuestro Departamento, mediante estudios de reacción cruzada, inmunoprecipitación indirecta y análisis inmunocitoquímicos demostraron su especificidad frente al receptor mGluR1a. Estos anticuerpos fueron utilizados para estudios inmunocitoquímicos descriptivos de muestras del SNC de rata, macaco y humanos


Item Type:Thesis
Additional Information:

Tesis de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Farmacia, Departamento de Microbiología II, leída el 30-05-2001

Directors:
DirectorsDirector email
Nombela, César
Sánchez Pérez, Miguel
Uncontrolled Keywords:Sistema nervioso central
Subjects:Medical sciences > Pharmacy > Microbiology
ID Code:4496
Deposited On:17 May 2005
Last Modified:30 Oct 2011 10:37

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