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Simulación y control de biofilms portadores de "Listeria monocytogenes" en la industria alimentaria

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Hernández Puga, Carmen (2016) Simulación y control de biofilms portadores de "Listeria monocytogenes" en la industria alimentaria. [Thesis]

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Abstract

1 OBJETIVOS Evaluar el impacto de las bajas temperaturas, la interacción entre P. fluorescens (Pf) y L. monocytogenes (Lm) en biofilms (BF) mixtos y la capacidad para persistir de Lm sobre (i) la capacidad de Lm para desarrollar BF; (ii) los parámetros estructurales de los BF formados; (iii) la respuesta de las células adheridas de Lm frente al tratamiento con quitosano; (iiii) y su capacidad para recuperarse tras el tratamiento, tanto a nivel de densidad celular como estructural. Además, se pretendió valorar el quitosano como agente de limpieza y desinfección de los BF en la industria alimentaria, profundizando en su impacto sobre la estructura. 2 METODOLOGÍA Para llevar a cabo estos objetivos se seleccionaron un total de 10 cepas de Lm (6 persistentes y 3 esporádicas aisladas por Ortiz y col. (2010) de una industria cárnica y la cepa Lm Scott A como referencia) y la cepa Pf ATCC 948TM para formar BF puros, de cada especie, y mixtos, de Pf y cada una de las cepas de Lm, iniciando los cultivos a un nivel de cada una de las bacterias de 104 UFC·ml-1. Para la formación de BF se empleó un sistema en batch, en el que cupones de vidrio desechables (22x22 mm) semisumergidos actuaron como soporte para la adhesión. Los BF se desarrollaron a 20°C (BF “templados”) y 4°C (BF “fríos”). Los tratamientos con quitosano al 1% (w/v) consistieron en la inmersión durante 1h. Para la recuperación, los cupones tratados se revitalizaron en medio fresco (Trytone Soya Broth, TSB) a 20°C/48h. La densidad celular adherida antes, después y durante la revitalización se determinó mediante siembra del BF residual recogido del cupón en medios generales, o selectivos en el caso de los BF mixtos. Para la determinación de la biomasa adherida mediante densitometría (λ=520-570 nm), los BF fueron teñidos con una solución al 1‰ de azul de coomassie. Para las observaciones de la estructura mediante microscopía confocal láser de barrido (CLSM) las muestras se tiñeron con diferentes fluorocromos, procesándose las imágenes obtenidas mediante el software Imaris 8.2. El tratamiento estadístico de los datos se hizo con el software Statgraphics Centurion...

Resumen (otros idiomas)

1 AIMS: In order to simulate Listeria monocytogenes (Lm)-carrying biofilms (BF) formed in food industry, this Ph. D. thesis tested the impact on Lm’s BF growth of: a) low environmental temperatures, b) interaction with Pseudomonas fluorescens (Pf) and c) the empirically checked ability, in a small collection of Lm strains, to persist in food industry facilities. Several aspects were analysed: i) viable Lm and Pf counts in mono- vs. binary species BF; ii) BF structure, visualized with Confocal Laser Scanning Microscopy (CLSM) using different fluorescent labels and advanced software for image analysis; iii) effect of chitosan exposure in terms of viable cell reduction and structural damage and iv) ability of Lm in the different types of BF, to recover from chitosan action. 2 METHODOLOGY: Ten Lm strains, including the reference strain Scott A, plus 9 isolates from meat industry, (6 persistent ones and 3 non-persistent) and Pf strain ATCC 948TM, were used to obtain mono- or 2 species BF, initiating cultures with 104 CFU·ml-1 of each. A batch system with semi-immersed (22x22 mm) glass coverslips as solid suport, was incubated at 20°C for 48 or 144h (to get warm BF), or at 4°C for 10 and 20 days (for cold BF). BF were plated in general or selective media, to quantify viable counts. For densitometry, biomass was stained with Coomassie Blue. For CLSM observation, different labels were used to identify matrix, total or viable cells, and Gram-/Gram+ bacteria. CLSM input was processed with Imaris 8.2 software. Statistic analysis was performed with Statgraphics Centurion software...

Item Type:Thesis
Additional Information:

Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos, leída el 01/02/2016

Directors:
DirectorsDirector email
San José Serrán, Carmen
Orgaz Martín, Belén
Uncontrolled Keywords:Industria alimentaria, Listeria monocytogenes, Pseudomonas fluorescens, bajas temperaturas, Biofilms
Palabras clave (otros idiomas):Food industry and trade, refrigeration, Low temperature, Biofilm structure
Subjects:Medical sciences > Veterinary > Microbiology
Medical sciences > Veterinary > Animal culture
ID Code:38812
Deposited On:17 Aug 2016 12:21
Last Modified:16 Jan 2019 09:48

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