Publication: Estudio de la fecundación "in vitro" en porcino : reducción de la poliespermia y optimización de la producción "in vitro" de embriones
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2004
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Universidad Complutense de Madrid, Servicio de Publicaciones
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Abstract
En los últimos años se han logrado progresos considerables en el desarrollo de los procedimientos de MIV, FIV y cultivo embrionario. Aunque los sistemas de producción in vitro disponibles son aptos para la generación de embriones porcinos, sigue sin resolverse el problema de la elevada poliespermia y de la baja capacidad de desarrollo de los embriones porcinos. El presente trabajo se llevó a cabo con el objetivo de reducir la poliespermia e incrementar el desarrollo embrionario preimplantacional, mejorando de este modo el rendimiento de la técnica de producción in vitro establecida en nuestro laboratorio. Para alcanzar este objetivo, se incoroporaron una serie de modificaciones a nuestro sistema de producción de embriones, abarcando todas las fases que constituyen la técnica: MIV, FIV y cultivo embrionario. El medio de MIV fue modificado, complementándolo con EGF o FPF. La adición de EGF permitió mejorar la maduración citoplasmática de los ovocitos, la monospermia y el desarrollo embrionario. Posteriormente, se valoró la modificación de tres de los principales componentes del sistema de FIV: el medio de fecundación, la concentración espermática y el método de cocultivo de los ovocitos con los espermatozoides. La combinación de medio de fecundación TBMm y de concentración espermática de 1x10(6) espermatozoides. La combinación de medio de fecundación TBMm y de concentración espermática de 1x10(6) espermatozoides/mL fue con la que se logró un mejor equilibrio entre el porcentaje de penetración y el de poliespermia. Además, la incorporación del método de cocultivo en dos pasos dio lugar a una notable reducción en la tasa de poliespermia. Finalmente, se evaluó la complementación del medio de cultivo de embriones con aminoácidos esenciales y no esenciales y la reducción del volumen de cultivo, lográndose con estas dos modificaciones incrementar en el desarrollo embrionario. Gracias al conjunto de las modificaciones incorporadas a nuestro sistema inicial de producción in vitro de embriones se consiguió mejorar de manera global el rendimiento de la técnica. De este modo, la maduración citoplasmática, valorada como el porcentaje de formación de pronúcleo masculino, se vió incrementada de un 73,6% a un 93,6%; el porcentaje inicial de penetración aumentó de un 53,2% a un 66,6%; la poliespermia se redujo de un 47,4% a un 36,2%; y el desarrollo embrionario hasta el estadio de blastocisto mejoró desde un porcentaje del 1% hasta el 28,9%. Los resultados obtenidos confirman que el limitado desarrollo hasta blastocisto de los embriones porcinos producidos in vitro no se debe a un fallo puntual en la técnica, sino a la combinación de una maduración citoplasmática inadecuada o incompleta, una elevada poliespermia, una formulación inadecuada de los medios de cultivos y unas condiciones de cultivo embrionario subóptimas. El incremento en el rendimiento final de la técnica que hemos alcanzado nos permitirá disponer de un mayor número de embriones así como de ovocitos maduros, para ser empleados en futuros estudios
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Tesis de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Veterinaria, Departamento de Medicina y Cirugía Animal, leída el 16-12-2002