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Desarrollo de protocolos bioseguros de edición génica para la corrección de la epidermólisis bullosa distrófica recesiva

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Chamorro Poyo, Cristina (2018) Desarrollo de protocolos bioseguros de edición génica para la corrección de la epidermólisis bullosa distrófica recesiva. [Tesis]

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Resumen

La Epidermolisis Bullosa Distrófica Recesiva (EBDR) es una grave enfermedad de fragilidad cutánea caracterizada por ampollas cutáneas generalizadas, deformidades de pies y manos y una alta predisposición al desarrollo de carcinomas epidermoides. No existe aún un tratamiento efectivo para esta enfermedad. La forma más grave de todas las epidermolisis bullosas, la EBDR severa generalizada (EBDR sevgen) se caracteriza por la ausencia total de colágeno tipo VII, componente principal de las fibrillas de anclaje que unen la epidermis a la dermis, debido a mutaciones nulas en COL7A1, el gen que codifica para este colágeno. Una mutación en el exón 80 de este gen (c.6527insC), que provoca la alteración de la pauta de lectura del ARN mensajero, se ha descrito en un alto porcentaje de los casos de EBDR estudiados en España (46%). La alta prevalencia de esta mutación justifica el desarrollo de una terapia personalizada para estos pacientes basada específicamente en la corrección clonal de esta mutación. Los protocolos de terapia génica clonal basados en la manipulación precisa de células madre epidérmicas requieren el empleo de herramientas moleculares de edición génica altamente eficientes. En este trabajo, hemos combinado vectores adenoasociados (AAV) para la introducción de un ADN molde, con vectores adenovirales para la expresión de nucleasas TALEN con el objetivo de abordar la corrección de la mutación c.6527insC. Después de la transducción con ambos vectores virales, encontramos altas frecuencias de reparación dirigida por homología (HDR) en clones de queratinocitos inmortalizados derivados de un paciente EBDR homocigoto para la mutación c.6527insC. Los clones editados presentaron recuperación de la expresión del transcrito de COL7A1 y de la correspondiente proteína a niveles fisiológicos...

Resumen (otros idiomas)

Recessive Dystrophic Epidermolysis Bullosa (RDEB) is a devastating skin fragility disease characterized by generalized skin blistering, mitten deformities and a high proneness to develop epidermoid carcinomas. To date, an effective treatment for RDEB remains unavailable. The severe generalized RDEB (RDEB sev-gen) form is characterized by absence of type VII collagen, the main component of the anchoring fibrils connecting dermis and epidermis caused by null mutations in COL7A1, the gene that encodes this collagen. A recurrent frame-shift mutation in exon 80 of this gene, c.6527insC, has been described in a very high proportion (46%) of the Spanish RDEB population. The high prevalence of this mutation justifies the development of a targeted therapy based on clonal correction for these patients. Clonal gene therapy protocols based on the precise manipulation of epidermal stem cells require highly efficient gene-editing molecular tools. In this work, we have combined adeno-associated virus (AAV)-mediated delivery of donor template DNA with transcription activator-like nucleases (TALE) expressed by adenoviral vectors to address the correction of the c.6527insC mutation. After transduction with these viral vectors, high frequencies of homology-directed repair were found in clones of immortalized keratinocytes derived from a RDEB patient homozygous for the c.6527insC mutation. Gene-edited clones recovered the expression of the COL7A1 transcript and collagen VII protein at physiological levels...

Tipo de documento:Tesis
Información Adicional:

Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular I, leída el 6 de Febrero de 2017

Directores (o tutores):
NombreEmail del director (o tutor)
Murillas Angoiti, Rodolfo
Larcher Laguzzi, Fernando
Palabras clave:Epidermolisis Bullosa Distrófica Recesiva, Protocolos de terapia génica clonal, Células madre epidérmicas
Palabras clave (otros idiomas):Recessive Dystrophic Epidermolysis Bullosa, Clonal gene therapy protocols, Epidermal stem cells
Materias:Ciencias Biomédicas > Medicina > Dermatología
Ciencias Biomédicas > Medicina > Histología
Ciencias Biomédicas > Biología > Biología molecular
Código ID:49142
Depositado:17 Sep 2018 10:37
Última Modificación:17 Sep 2018 10:37

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