Universidad Complutense de Madrid
E-Prints Complutense

Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico e identificación de especies fúngicas causantes de neumonías oportunistas

Impacto

Downloads

Downloads per month over past year



Valero Fernández, Clara Isabel (2018) Desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico e identificación de especies fúngicas causantes de neumonías oportunistas. [Thesis]

[img]
Preview
PDF
15MB


Abstract

La incidencia de las neumonías fúngicas oportunistas ha aumentado en los últimos años debido al incremento de la población inmunodeprimida susceptible a la infección. Su diagnóstico microbiológico es complejo, ya que los métodos convencionales carecen de sensibilidad y especificidad suficientes y, aunque en los últimos años se han desarrollado nuevas técnicas, muchas de ellas aún requieren de más estudios para garantizar su efectividad. En esta tesis se han desarrollado distintos métodos basados en qPCR, secuenciación de ADN y espectrometría de masas para el diagnóstico precoz y la identificación de especies fúngicas causantes de neumonías oportunistas. En el primer objetivo, se ha desarrollado una qPCR panfúngica que combina distintas metodologías con valores de sensibilidad y especificidad globales de 83,3% y 100%, pudiéndose evitar la secuenciación en el 67,8% de los casos positivos, lo que implica un adelanto considerable del tiempo de respuesta. En el segundo objetivo, se realizó un estudio basado en qPCR para definir el número de copias de cuatro genes mitocondriales de Pneumocystis jirovecii en muestras de pacientes en distintos estadios de la infección y se revisaron los datos clínicos de dichos pacientes. Los resultados demostraron que el número de copias de los cuatro genes diferían considerablemente entre ellos y en los distintos estadios de la infección lo que permitió clasificar a los pacientes en cinco grupos. La revisión de los datos de los pacientes sugiere que la qPCR sería el criterio más adecuado para la discriminación entre infección activa y colonización, siendo el gen mtSSU rRNA el mejor candidato para la cuantificación de P. jirovecii en muestras respiratorias debido a su alta sensibilidad y estabilidad. En el tercer objetivo, se construyó una base de datos de perfiles proteicos de referencia para la identificación de Histoplasma capsulatum mediante la tecnología MALDI ToF. Todas las cepas de H. capsulatum incluidas en el proceso de validación fueron identificadas correctamente con una especificidad del 100%. Además, el 86,6% de ellas obtuvo una puntuación mayor de 1,7, considerada como correcta para la identificación a nivel de género. El descenso de este punto de corte permitió aumentar la sensibilidad sin sacrificar la especificidad. Se pudo adelantar el tiempo de identificación respecto al cultivo, ya que las formas filamentosas se identificaron a los sietes días de crecimiento, momento en el que todavía no presentaban los caracteres morfológicos necesarios para su identificación mediante examen microscópico. Por último, en el cuarto objetivo, se revisaron 13 casos de pacientes con histoplasmosis africana y se estudiaron las cepas aisladas a partir de muestras de dichos pacientes mediante métodos clásicos de tipificación, MLSA y determinación del tipo sexual utilizando métodos moleculares. Al contrario de lo tradicionalmente descrito, la mayoría de los pacientes presentaron SIDA y enfermedad diseminada, mientras que los métodos clásicos de identificación no permitieron diferenciar las dos variedades. Los métodos moleculares permitieron la agrupación de todas las cepas africanas de ambas variedades, evidenciando su relación genética y sugiriendo que la clasificación tradicional en tres variedades debería ser revisada. Finalmente, la determinación del tipo sexual reveló una distribución desigual en las cepas africanas. Los resultados de este trabajo evidencian la imposibilidad de diferenciar las dos variedades de H. capsulatum, así como la necesidad de más estudios para conocer la epidemiología y las características de la infección. En resumen, los trabajos incluidos en esta tesis doctoral, contribuirán a la mejora del diagnóstico precoz y de la identificación de especies fúngicas causantes de neumonías oportunistas y al adelanto del establecimiento de una terapia antifúngica eficaz, lo que permitirá la reducción de la morbilidad y mortalidad de este tipo de infecciones.


Item Type:Thesis
Additional Information:

Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento de Microbiología III, leída el 19-05-2017

Directors:
DirectorsDirector email
Buitrago Serna, María José
Uncontrolled Keywords:Micología médica, neumonías
Palabras clave (otros idiomas):Medical mycology, pneumonia
Subjects:Medical sciences > Biology > Microbiology
ID Code:49303
Deposited On:28 Sep 2018 08:26
Last Modified:10 Dec 2018 15:30

Origin of downloads

Repository Staff Only: item control page