Publication: Efecto del tamoxifeno, raloxifeno y toremifeno sobre la actividad y expresión del receptor de LDL en linfocitos primarios humanos
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2015-06-17
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Universidad Complutense de Madrid
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Abstract
El tratamiento con los moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM) disminuye las concentraciones plasmáticas de colesterol-LDL. El mecanismo responsable de dicho efecto no se ha establecido. Nuestro grupo había demostrado que el tamoxifeno (TAM) aumenta la expresión y actividad del rLDL en la línea celular MOLT-4 y que la combinación con lovastatina produce una estimulación sinérgica. En el presente trabajo hemos estudiado el efecto del TAM, raloxifeno (RAL) y toremifeno (TOR) y su combinación con lovastatina sobre la actividad del rLDL en linfocitos primarios de sujetos normolipémicos o con hipercolesterolemia familiar (FH), deficientes en rLDL, y en las líneas celulares MOLT-4 y HepG2, así como los mecanismos implicados en aquellos efectos, incluyendo el posible papel de los receptores de estrógenos.Los linfocitos se aislaron de sangre periférica, se trataron con los diferentesfármacos y se analizó la captación de las LDL marcadas con 1,1`-dioctadecil-3,3,3,3`-tetrametillindocarbocianineperclorato (DiI-LDL) mediante citometría de flujo.TAM, TOR y RAL, por este orden, aumentaron la captación de DiI-LDL demanera dependiente de la dosis y el tiempo de tratamiento. Paralelamente, dichos fármacos incrementaron la cantidad de rLDL en los linfocitos expuestos a LDL. El tratamiento con cualquiera de los tres SERM en presencia de DiI-LDL produjo la acumulación de gránulos de colesterol libre citoplasmáticos, cuya localización coincidía con la del DiI, indicando que el colesterol derivado de las LDL es retenido en los endosomas tardíos/ lisosomas. Además, los SERM se opusieron a la represión de la expresión de LDLR, HMGCR, FASN y SREBF2, así como a la disminución de la cantidad de SREBP-2 nuclear que inducen las LDL. Por otro lado, los SERM inhibieron la incorporación de [14C]oleato a los ésteres de colesterol, mediada por la acil-coenzima A: colesterol aciltransferasa.Si bien la lovastatina sola no alteró la captación de DiI-LDL por los linfocitos primarios ni por las células MOLT-4 y HepG2, combinada con los SERMs consiguió estimular dicha captación más que el correspondiente SERM solo. Sin embargo, este efecto sinérgico fue más leve en los linfocitos primarios que en las líneas celulares. La adición de ICI 182,780, un inhibidor de los receptores de estrógenos (ER), no alteró el efecto estimulador de ninguno de los SERM sobre la captación de DiI-LDL por los linfocitos. El tratamiento con 17ß-estradiol no produjo efecto alguno sobre la actividad del rLDL. Sin embargo, el endoxifeno, considerado el metabolito activo más importante del TAM, incrementó la captación de DiI-LDL en el mismo grado que el TAM.El efecto de los SERM sobre la actividad de rLDL en linfocitos de pacientes con diagnóstico clínico de FH, incluyendo pacientes FH mutantes heterozigotos en el rLDL, fue similar al observado en los linfocitos de sujetos normolipémicos, mientras que el efecto de los SERM en los linfocitos de tres pacientes FH homozigotos fue nulo. Concluimos que TAM, TOR y RAL estimulan la actividad y la expresión del rLDL en linfocitos humanos primarios mediante la interrupción de la salida del colesterol de las LDL desde los endosomas tardíos/lisosomas. El efecto de los SERM sobre la expresión del rLDL es independiente de los ER y aquel se mantiene en el endoxifeno. La combinación de cada uno de los tres SERM con la lovastatina produjo un efecto sinérgico sobre la actividad del rLDL, aunque más débil en los linfocitos primarios que en las células HepG2 y MOLT-4. La magnitud del efecto de los SERM sobre la actividad del rLDL en los linfocitos de pacientes FH con deficiencia parcial del rLDL es similar a la producida en los de sujetos normolipémicos. El aumento de la actividad del rLDL mediante el mecanismo descrito en este estudio puede contribuir a la disminución de la concentración de colesterol-LDL que los SERM causan en los pacientes.
Description
Tesis inédita de la Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Ciencias Biológicas, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, leída el 17-03-2015